MACS (MAGNETIC-ACTIVATED CELL SORTING) - METODO DI SELEZIONE DEGLI SPERMATOZOI.

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(MACS) è un metodo efficace per selezionare gli spermatozoi funzionali e aumentare i tassi di gravidanza.

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Il sistema MACS® ART Annexin V è stato progettato per rimuovere selettivamente le cellule difettose, anche se morfologicamente indistinguibili, dal campione del paziente. Il processo inizia con l'etichettatura magnetica degli spermatozoi difettosi, che vengono poi fatti passare attraverso una colonna di separazione dove vengono catturati selettivamente. Gli spermatozoi intatti che non presentano segni di frammentazione del DNA passano attraverso la colonna e vengono raccolti per un ulteriore utilizzo (ICSI o crioconservazione).

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Il prelievo diretto di spermatozoi pronti per la fecondazione rappresenta un vantaggio fondamentale rispetto ai tradizionali test di frammentazione del DNA, nei quali il paziente riceve solo informazioni poco pratiche sulla percentuale di cellule danneggiate.

IVM - maturazione degli ovociti in vitro

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È il prelievo di ovociti immaturi da ovaie non stimolate o minimamente stimolate. La maturazione dell'ovocita e l'acquisizione della sua capacità di fecondazione avvengono in condizioni di laboratorio.

Indicazioni:

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• nelle pazienti in cui non è possibile ottenere ovociti maturi con la stimolazione convenzionale
• in pazienti ad alto rischio di sindrome da iperstimolazione
• nelle pazienti con sindrome dell'ovaio policistico (PCOS)
• in pazienti con crescita follicolare altamente differenziata nell'ambito di una singola stimolazione
• nelle pazienti sottoposte a chirurgia ovarica

ME - Monitoraggio degli embrioni

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Il monitoraggio embrionale continuo non invasivo è un metodo di coltura embrionale in vitro che consente di monitorare lo sviluppo degli embrioni senza la necessità di controllarne lo sviluppo al microscopio fuori dall'incubatrice. Consente il loro monitoraggio continuo su un monitor. La selezione dell'embrione più adatto per il trasferimento è più efficiente e quindi aumenta le possibilità di successo della gravidanza.

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I principali vantaggi del ME sono:

• ridurre al minimo la manipolazione degli embrioni, riducendo così il rischio di danni agli embrioni stessi
• una panoramica costante dello stato di tutti gli embrioni
• controllo preciso_{di CO2}, _O2 e temperatura durante la coltura embrionale
• documentazione accurata dello stato degli embrioni

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Questo metodo relativamente nuovo, introdotto nella riproduzione assistita, consente una migliore selezione degli embrioni adatti al trasferimento nell'utero e aumenta la percentuale di gravidanze dopo il trattamento. Utilizziamo il dispositivo EmbryoScope per il monitoraggio permanente degli embrioni.

La coltura degli embrioni in condizioni di laboratorio avviene il più delle volte da 2 a 5 giorni dopo la puntura ovarica.

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Per un numero maggiore di embrioni, si utilizza una coltura standard di cinque giorni per selezionare l'embrione morfologicamente migliore, che consente il controllo e la successiva selezione degli embrioni più adatti per il trasferimento (= trasferimento in utero).

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Se il numero di embrioni è basso (2-3 embrioni) e presentano uno sviluppo diverso già all'inizio della coltura, è possibile trasferire gli embrioni nell'utero il secondo o terzo giorno di coltura.

Embryotransfer - il trasferimento di embrioni nell'utero è una procedura facile e indolore per la paziente, simile a una normale visita ginecologica. Gli embrioni vengono introdotti nella cavità uterina attraverso un sottile catetere di trasferimento.

La KET o trasferimento di embrioni scongelati è uguale al trasferimento di embrioni. La preparazione della paziente alla KET consiste nella stimolazione ormonale del rivestimento uterino, controllata dagli ultrasuoni. Gli embrioni vengono scongelati, ne viene valutata la qualità e dopo una breve coltura vengono inseriti nella cavità uterina attraverso un sottile catetere di trasferimento.

AZH - schiusa zonale assistita

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Tecnica di micromanipolazione in cui l'involucro (zona pellucida) dell'embrione viene interrotto in una piccola area. Affinché l'embrione si annidi nel rivestimento uterino, è necessario che esca dalla zona pellucida, che lo protegge per tutto il periodo di coltura. In alcuni casi, l'impianto dell'embrione può fallire perché la zona pellucida è troppo dura. Il raggio laser viene utilizzato per rompere delicatamente l'involucro e liberare la strada per l'embrione. Con l'AZH non è possibile danneggiare l'embrione.

EmbryoGlue® è un mezzo utilizzato per il trasferimento degli embrioni nell'utero che contiene, oltre a tutti i nutrienti importanti necessari per lo sviluppo ottimale dell'embrione, una sostanza chiamata ialuronano in una concentrazione maggiore. Lo ialuronano si trova naturalmente in concentrazioni più elevate nel liquido follicolare e nel liquido delle tube di Falloppio e dell'utero, dove crea un ambiente di maggiore viscosità. Ricerche indipendenti hanno dimostrato maggiori probabilità di gravidanza quando si utilizza il terreno di coltura EmbryoGlue® per il trasferimento dell'embrione nell'utero rispetto al terreno a bassa concentrazione o privo di acido ialuronico. EmbryoGlue® è applicabile per il trasferimento di embrioni di tutti gli stadi di sviluppo, da quelli di due giorni fino alle blastocisti, indipendentemente dal fatto che vengano trasferiti embrioni freschi o congelati.

PGS - screening genetico preimpianto

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La PGS è la ricerca di qualsiasi cambiamento nel patrimonio genetico dell'embrione. Con questo metodo si controlla l'intero DNA in ampie sezioni. La PGS utilizza la tecnica dell'ibridazione in situ a fluorescenza (FISH), che consente di analizzare un numero limitato di cromosomi 5 o 8, il più delle volte quelli le cui variazioni di numero portano all'aborto spontaneo o alla nascita di un bambino con una grave disabilità genetica (per esempio, la sindrome di Down, di Patau e di Edwards). Il metodo FISH è in gran parte sostituito dal metodo array CGH (i cosiddetti microchip), che consente di analizzare tutti i cromosomi mentre la fecondazione stessa avviene naturalmente (cioè lo spermatozoo e l'ovulo si fondono spontaneamente).

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‍Indicazioni:

• età del paziente superiore a 37 anni
• ripetuti cicli di FIVET non riusciti
• aborti spontanei ripetuti
• un partner con un grave disturbo dello spermiogramma
• precedente trattamento del cancro in uno dei partner

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PGD - Diagnosi genetica preimpianto

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Nel caso della DGP, si tratta della ricerca di un'alterazione genetica specifica. Si rivolge cioè a genitori portatori di riarrangiamenti del materiale genetico tra i cromosomi (traslocazioni, delezioni, ecc.). Questa tecnica permette di selezionare un embrione non portatore dell'alterazione.

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Diagnosi genetica preimpianto delle malattie monogeniche

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Il test genetico sugli embrioni è pensato per le coppie che hanno una variazione genetica nota e un rischio maggiore di avere un figlio con un carico genetico. Il prerequisito per l'utilizzo di questo metodo è che la malattia sia testabile a livello genico, in altre parole, la specifica variazione genica (mutazione) responsabile della malattia deve essere nota nella famiglia (fibrosi cistica, atrofia muscolare spinale, distrofia muscolare di Duchenne, malattia di Huntington).